Электронно-микроскопическое исследование показало, что эти включения представляют собой аморфные сферические глобулины, заключенные в эндоплазматический ре-тикулум. В процессе культивирования вне организма клетки крови больных продолжали синтезировать и выделять в культу-ральную среду легкие цепи Ig. Одновременное изучение лиза-тов клеток, напротив, выявило преобладание в них тяжелых целей Ig.добавть объявление бесплатно Эти данные представляют интерес в плане дальнейшего изучения особенностей синтеза и нарушения секреции Ig в лейкозных клетках.
При хроническом лимфолейкозе в крови нередко отмечают увеличенное относительное содержание клеток с Fc-рецепторами к IgG.
На лимфоцитах больных хроническим лимфолейкозом с помощью методики ЕАС-розеткообразования обнаруживаются C3d- рецепторы и не определяются или выявляются на небольшом проценте клеток СЗЬ-рецепторы, которые в процессе дифференцировки В-клеток появляются позднее.
Клетки больных несут FcM-рецепторы и рецепторы к гемагглютинину А из Helix pomatia, которые в норме характерны для Т-клеток.
В крови больных хроническим лимфолейкозом, как правило, значительно возрастает содержание лимфоцитов с рецепторами к эритроцитам мышей – М-РОК. Исключение составляют редкие случаи заболевания, когда на поверхности лимфоцитов определяются IgG. По Catovsky, Galton, М-РОК были обнаружены в крови 51 из 52 больных хроническим лимфолейкозом и среднее содержание их составило 65%. Близкие показатели приводят и другие авторы, пользовавшиеся различными модификациями методики розеткообразования.
Полученные нами данные о содержании М-РОК в периферической крови больных хроническим лимфолейкозом (от 47 до 68%) совпадают с результатами других исследователей, проводивших реакцию розеткообразования способом, аналогичным нашему.
Однако в периферической крови присутствуют и иммунобласты (стадия G2), и клетки на ранних этапах постмитотического периода со значительно более низкой концентрацией поверхностных рецепторов, чем лимфоциты в поздней Gi- или S-фазе. Таким образом, различная плотность поверхностных рецепторов может характеризовать пребывание лимфоцитов в различных стадиях клеточного цикла.
При хроническом лимфолейкозе число лимфоцитов, лишенных поверхностных маркеров Т- и В-клеток, было незначительным.
Цитохимическое исследование различных видов розеткообразующих клеток периферической крови больных хроническим лимфолейкозом позволило выявить присущие им особенности, касающиеся локализации и активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы.
В клетках, образующих спонтанные розетки с эритроцитами барана (Т-лимфоцитах), обнаруживалась умеренная или выраженная гранулярная реакция на кислую фосфатазу.скачать матчи nfl Только у трех больных 8-10% Е+-лимфоцитов не содержали видимого продукта реакции в цитоплазме. Интересно, что в этих случаях содержание СЗ+-лимфоцитов было более высокое, чем клеток с FcG- или FcM-рецепторами. E+Fco- и E+Fcm -субпопуляции давали выраженную реакцию на кислую фосфатазу в виде гранул различной величины, а в Е+СЗ+-лимфоцитах активность этого фермента чаще была умеренной.
FcG-, FcM- и СЗ-РОК были представлены отмеченными выше типами лимфоцитов с различной реакцией на кислую фосфатазу. Однако соотношение их у отдельных больных значительно различалось. В большинстве случаев (9 больных) число клеток с отрицательной реакцией на этот фермент не превышало 29% всех В-лимфоцитов с соответствующим видом рецептора, а основным был умеренный диффузный или мелкогранулярный тип реакции. Относительное содержание лимфоцитов плазмацитоидного типа с высокой активностью кислой фосфатазы у этих больных было невелико (14,5%).
Таким образом, данные цитохимических исследований не только позволяют выявить энзимохимические различия патологических и нормальных лимфоцитов, но и указывают на раз-нокачественность популяции клеток при хроническом лимфолейкозе. Неоднородность, или полиморфизм, цитохимических признаков можно объяснить тем, что помимо основного клона патологических лимфоцитов, находящихся в различных фазах митотического цикла, в крови могут циркулировать сохранившиеся Т-лимфоциты и неизмененные В-лимфоциты.
Рядом авторов при окраске РНК-содержащих структур ядрышек с помощью метиленового синего или голуидинового синего обнаружено увеличение содержания ма-кронуклеолярных лимфоцитов у больных хроническим лимфолейкозом.купить технику для дома Учитывая связь морфологии ядрышек с функциональной активностью клеток и интенсивностью синтеза предшественников рибосомальной РНК, есть основания предполагать, что основную массу макронуклеолярных лимфоцитов составляют лейкозно трансформированные В-лимфоциты и сохранившиеся нормальные Т-клетки.
Данные иммунологических исследований свидетельствуют о том, что, несмотря на низкое процентное содержание Т-лимфо-цитов в крови больных хроническим лимфолейкозом, абсолютное количество их не изменяется или даже повышается.
Наибольший интерес для понимания патогенеза хронического лимфолейкоза и нарушений, определяющих клиническую симптоматику и сопутствующие осложнения, имеет изучение функциональных особенностей В- и Т-лимфоцитов и взаимодействия их между собой и с другими клетками в ходе иммунологических реакций.
Пользуясь иммунологическими и цитохимическими маркерами дифференцировки лимфоцитов, мы смогли выделить три группы больных с различными цитохимическими вариантами хронического лимфолейкоза. Первую группу составили больные, у которых патологический клон лимфоцитов крови составляли В-клетки на поздней антигеннезависимой или ранней антигензависимой стадии дифференцировки (6 больных). Эти клетки в равной мере образовывали Fcg-, Fcm- и СЗ-розетки, а также давали отрицательную или слабую положительную реакцию на кислую фосфатазу и неспецифическую эстеразу.
У больных второй группы преимущественным клеточным компонентом пролиферирующего злокачественного клона являлись В-лимфоциты на С3+-стадии антигензависимой дифференцировки.новий ipad К этой группе отнесено большинство рассмотренных нами случаев, для В-лимфоцитов которых была характерна в большей степени выраженная экспрессия СЗ-рецепторов, чем FcG- и Рсм-рецепторов. У больных этой группы в крови превалировали лимфоциты с умеренной диффузной или мелкогранулярной реакцией на кислую фосфатазу.
Третья, наиболее редкая группа больных с хроническим лимфолейкозом характеризовалась высокой степенью плазматизации лейкозных клеток с типичным для этой стадии антигензависимой дифференцировки FcG-рецептором. В большинстве Рс0+-клеток обнаруживалась высокая активность кислой фосфатазы с характерным для плазматизирующихся клеток распределением продукта реакции и умеренная активность неспецифической эстеразы.
Помимо доминирующего патологического клона в крови больных выявлялись немногочисленные лимфоидные клетки, несущие другие классы Ig. В абсолютном большинстве случаев число таких клеток не превышало 4-7%, и только у одного больного (К-а) IgG+-wieTOK было 16%, a IgA+- 10%. Возможно, лимфоциты, несущие slg иных классов, чем клетки патологического клона, и дающие более интенсивную флюоресценцию, принадлежат к остаточной популяции нормальных В-лимфоцитов.
При хроническом лимфолейкозе относительное содержание Т-клеток в периферической крови было значительно снижено по сравнению с нормой и составляло 6,2-23,6% (Р<0,001), абсолютное количество их оставалось в пределах нормы (больной М-а) или было значительно увеличено (Р<0,001). Возможно, подобное увеличение количества Т-клеток отражает активацию данной популяции лимфоцитов как реакцию на пролиферацию патологического «лона. Об этом свидетельствуют результаты исследования различных фенотипических субпопуляций Т-лимфоцитов. При хроническом лимфолейкозе увеличено содержание Т-клеток, образующих стабильные спонтанные розетки с бараньими эритроцитами, устойчивые к температуре 37°. В периферической крови здоровых людей относительное содержание их незначительное, при стимуляции различными митогенами оно возрастает. Ранее нами было показано присутствие подобных Т-лимфоцитов среди популяций клеток миндалин. Однако не исключено, что Т-лимфоциты со стабильными Е-рецепторами являются незрелой популяцией, поскольку образование Е37-розеток характерно для большинства тимоцитов.пфл Еще одно объяснение этого явления – дефектность популяции Т-клеток, у которых нарушается мобильность Е-рецепторов.
Относительное содержание E+Fc+-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе было сниженным (Р<0,01), а у больного М-о субпопуляция Т-клеток с Fc-рецепторами к IgG не была обнаружена. Абсолютное содержание этих лимфоцитов было значительно увеличено (Р<0,001). Относительное и абсолютное содержание субпопуляций Т-клеток с Fc-рецепторами к IgM и СЗ-рецепторами в крови больных хроническим лимфолейкозом превышало уровень, выявляемый у здоровых людей. Поскольку Т-клетки, несущие СЗ-рецепторы, обнаружены в эмбриональном тимусе, субпопуляцию Е+СЗ+-лимфоцитов можно отнести к незрелым Т-клеткам, появляющимся в крови при хроническом лимфолейкозе. Увеличение количества E+Fc+- и E+Fc+-субпопуляций скорее можно связать с активацией Т-клеток при данном виде патологии. В пользу этого свидетельствуют и результаты исследования функциональных свойств Т-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе.
При хроническом лимфолейкозе на В-лимфоцитах обнаруживались Fco-, FcM- и СЗ-рецепторы. Относительное и абсолютное содержание В-клеток с такими рецепторами у отдельных больных значительно варьировало. Относительное число Fc + клеток не превышало 37%, Fc+- 37,6%, а В-клеток с СЗ-рецепторами - 55,3%. Следует отметить сходство поверхностных рецепторов для IgM на В-лимфоцитах миндалин при хроническом тонзиллите и лимфоцитах периферической крови больных хроническим лимфолейкозом. Для выявления их не требуется длительное предварительное культивирование при 37°. Если предположить, что поверхностные Fcq-, FcM- и СЗ-рецепторы присутствуют на отдельных субпопуляциях (т. е. фенотипические субпопуляции не перекрываются), то сумма относительного числа трех фенотипических субпопуляций у большинства обследованных больных не должна превышать 46,4-83,8% всех В-лимфоцитов. Однако показано, что на большинстве В-клеток с FcM-рецепторами присутствуют и FcG-рецепторы. СЗ-рецепторы также обычно выявляются на клетках, несущих другие поверхностные рецепторы.
казантипМакронуклеолярные лимфоциты с крупными компактными или кольцеобразными ядрышками различались по степени базофилии цитоплазмы. В периферической крови больных хроническим лимфолейкозом присутствовали немногочисленные крупные лимфоциты с выраженной базофилией цитоплазмы и большими ядрышками неправильной формы. Подобная морфология ядрышек характерна для лимфоцитов в постсинтетическом периоде G2, т. е. клеток, вступающих в митоз. Возможно, относительное содержание таких лимфоцитов характеризует интенсивность пролиферации клеток патологического «лона. Лимфоидно-ретикулярные клетки обычно имели крупные компактные ядрышки и умеренную базофилию цитоплазмы.
Результаты иммунологических исследований лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. В суспензиях, выделенных в градиенте плотности, лимфоциты составляли 93±5,7%. Во всех рассмотренных нами наблюдениях выявлено преобладание В-клеток. От 74 до 91 % лимфоцитов периферической крови больных хроническим лимфолейкозом несли поверхностные Ig, причем у большинства больных обнаружена пролиферация М+-клеток. Только в трех случаях на патологических клетках выявлены IgG, а в одном – IgA. При хроническом лимфолейкозе плотность Ig-детерминант на лимфоцитах была значительно ниже, чем у здоровых людей. Возможно, поэтому применение иммунофермеитативного метода выявления поверхностных Ig с помощью поли- и моноспецифических сывороток, меченных пероксидазой хрена, не позволило получить четкие результаты. В реакции иммунофлюоресценции обнаруживалась слабая точечная, равномерно распределенная реакция. Более интенсивная локальная флюоресценция в виде «перстенька» наблюдалась только на 3-14% клеток.
казантипУ пяти больных преобладали В-клетки с отрицательной реакцией на кислую фосфатазу. Так, у больного П-о 72% Fc(+-, 81% Fct- и 87 %СЗ+-В-лимфоцитов не обнаруживали активности этого фермента, в остальных клетках с соответствующим фенотипом выявлялась очень слабая диффузная реакция.
Совершенно иная картина наблюдается при повышенном числе плазматизирующихся лимфоцитов (больные К-а и М-а). Среди Fc -В-лимфоцитов доминирующими были клетки с высокой активностью кислой фосфатазы. Продукт реакции обнаруживался в виде единичных крупных или множественных мелких гранул, равномерно распределенных по всей цитоплазме. FCm- и С3+-клетки в основном были представлены лимфоцитами со слабой или умеренной диффузной реакцией на кислую фосфатазу, а клетки с высокой активностью этого фермента в данных популяциях не обнаружены 70% В-лимфоцитов, не имеющих поверхностных рецепторов давали умеренную, 12%-очень интенсивную гранулярную реакцию на кислую фосфатазу. Необходимо отметить, что в этих двух случаях число Fct-клеток более чем в два раза превышало количество Fc – и СЗ+-лимфоцитов. Это является еще одним подтверждением того, что В-лимфоциты при дифференцировке в плазматические клетки в первую очередь теряют FcM- и СЗ-рецепторы. Обращает на себя внимание, что у этих двух больных были сублейкемические или невысокие показатели числа лейкоцитов и относительно умеренное процентное содержание лимфоцитов.
Ранее нами было показано, что активность кислой фосфатазы является маркером антигензависимой дифференцировки В-лимфоцитов. Учитывая распределение лимфоцитов с различной активностью кислой фосфатазы в Fcg-, Fc м- и СЗ+.-популяциях клеток, можно прийти к заключению, что указанные выше цитологические варианты хронического лимфолейкоза различаются по степени зрелости злокачественных клеток: у входящих в эти три группы больных блокировка созревания В-лимфоцитов произошла на различных стадиях дифференцировки.
